基于CRISPR/Cas9系统构建重组人丁酰胆碱酯酶定向整合的山羊胎儿成纤维细胞株

摘要： 目的 利用CRISPR/Cas9介导的同源定向修复机制构建重组人丁酰胆碱酯酶（rhBChE）基因敲入山羊胎儿成纤维细胞株（GFF），为后续制备表达rhBChE的山羊提供细胞株。方法 针对山羊β-酪蛋白（CSN2）基因设计并筛选有效sgRNA靶点，通过电转染、流式分选和PCR产物测序，在山羊乳腺上皮细胞（GMEC）中确认CSN2基因有效sgRNA；构建靶向有效靶点的红色荧光报告基...