克隆基因在细胞中表达对于理论研究和实际应用都是十分重要的。在理论研究中,通过原核和真核系统表达并纯化的蛋白质可用于研究蛋白质的结构与功能、蛋白与蛋白、蛋白与核酸的相互作用、制备抗体和突变研究等表达才能探索...[继续阅读]

    原核表达系统中外源基因的诱导表达的基本原理为:将外源基因克隆到表达载体中,转化到宿主菌-大肠杆菌中表达。先让宿主菌生长,Lac Ⅰ产生的阻遏蛋白与Lac操纵基因结合,从而不能进行外源基因的转录和表达,此时宿主菌正常生长。...[继续阅读]

    真核表达系统与原核表达系统有相似之处,但是与其相比,真核表达系统也具有自己的特点。真核表达载体通常还有选择标记、启动子、转录翻译终止信号、mRNA加poly A信号或染色体整合位点等。真核表达载体通常未穿梭载体,有两套复...[继续阅读]

    蛋白质印迹法是Western blot分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞...[继续阅读]

    一、基本原理核酸是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子,具有复杂的结构和重要的生物功能。核酸可分为脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic,DNA)和核糖核酸(oxyribonucleic,RNA)两类。DNA由含有A、G、C和T碱基的脱氧核糖核苷酸组成;而RNA由含有...[继续阅读]

    为了定性或定量检测目的核酸,在进行核酸杂交时,将一段已知序列的核酸作上标记,去探测或追踪所要研究的目的核酸,这段带有标记的核酸分子被称为探针(probe)。探针的标记是核酸分子杂交技术中重要的环节之一。理想的核酸探针分...[继续阅读]

    分子生物学研究中常常要对电泳分离后的DNA进行分子杂交,但琼脂糖凝胶机械强度不高,容易断裂,DNA片段容易在凝胶中扩散,不适于进行杂交操作。1975年,苏格兰爱丁堡大学E. M. Southern首先提出了将DNA区带原位转印到硝酸纤维素膜上,再...[继续阅读]

    将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上杂交,用于检测特异性RNA的RNA印迹技术正好与DNA印迹技术相对,故被称为Northern印迹杂交(Northern blot)。Northern印迹杂交的基本过程是:首先,获得RNA,然后将RNA样品通过变性琼脂糖凝胶电泳加以分...[继续阅读]

    聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板...[继续阅读]

    一、基本原理原位PCR技术的基本原理就是将PCR技术的高效扩增与原位杂交的细胞定位结合起来,从而在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定的DNA或RNA序列。进行原位PCR的待检标本一般先经化学固定,以保持组织细胞的良好形态结构...[继续阅读]