许多实验涉及蛋白质的鉴定(例如探究特定酶的作用模式),只有在相关的蛋白质可以从细胞内许多其他蛋白质中分离出来后才有可能成功。得到均一的蛋白质溶液或者蛋白质复合物也是其他分析过程的先决条件,例如序列分析、蛋白质...[继续阅读]

    获得蛋白质的原料多种多样。简单的情况是所需要的蛋白质已经存在于溶液中(例如血液、牛乳或者细胞培养物的上清液),纯化可以直接开始。然而,在多数情况下,含有蛋白质的抽提物需要从起始材料制备。在过去,动物和植物细胞常...[继续阅读]

    7.3.1电泳原理蛋白质在水溶液中,除了在等电点之外的所有pH下,均带有一定的电荷。因此它们可以在电场中迁移。迁移的比速率v与每分子所带电荷数成正比,与粒子的Stokes半径和介质的黏度成反比:v=z/(6πηr)。凝胶电泳分离蛋白比在游...[继续阅读]

    这些技术追溯到早期的蛋白质纯化。在过去,通过改变蛋白的溶解性沉淀蛋白常常是唯一的可以使用的富集方法。现在,富集经常是通过疏水相互作用色谱来获得(参见7.5)。蛋白质的溶解性主要取决于蛋白表面亲水和疏水区域的分布。...[继续阅读]

    7.5.1分离的一般规律本节中提到的分离规律可以用于纯化所有种类的蛋白质。它们的大多数基于蛋白质对于凝胶基质的特定吸附,以及接下来进行的以含有线性的或者逐步分级的浓度梯度的特定缓冲液洗脱。使用吸附技术非常流行并...[继续阅读]

    7.6.1例1:从牛视网膜杆细胞胞浆中纯化核苷二磷酸激酶核苷二磷酸激酶(NDPK)在自然界普遍存在,主要是胞浆蛋白,能够从5′-核苷三磷酸(NTPs)转移第三位高能磷酸残基到核苷二磷酸(NDPs)上。因此它们是细胞中从ATP和NDPs合成其他NTPs所必需...[继续阅读]

    Deutscher,M.P.(ed.)1990,MethodsinEnzymology,vol.182,GuidetoProteinPurification,AcademicPress,SanDiego.Janson,J.C.,Ryden,L.1998,ProteinPurification,Principles,HighResolutionMethodsandApplications,2ndedn,Wiley-VCH,Weinheim.Scopes,R.K.1994,ProteinPurificatio...[继续阅读]

    质谱是仪器分子分析的高灵敏度技术,它发明于约90年前。物理学家汤姆森和阿斯顿在英格兰剑桥开发了该技术,最初用于元素分析。在20世纪50年代质谱扩展到有机化学。现今,有很多类型的质谱专门用于分析元素、小的气体分子,或者...[继续阅读]

    质谱仪由三个功能单元组成:离子源、质量分析器和检测器。对于质谱分析而言,游离气体离子产生于在离子源中的样品,然后在高真空中聚焦成离子束。质量分析器根据粒子束中离子的质荷比(m/z)将离子分离,这些离子被检测器记录。...[继续阅读]

    每一个质谱图都需要用标准物质校正,以保证精确的质量确定(外标法)。更精确的数据可以用被称为内标法的方法获取,该法在记录的图谱中包括已知质核比的峰。在样品中已经存在的来自分析物的信号(例如已知的污染物)可以用作参...[继续阅读]