Ausubel,F.M.,Brent,R.,Kingston,R.E.etal.2004,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Wiley,Hobo-ken....[继续阅读]

    有几种方法被用于将核酸与其他物质分离。色谱(Chromatography,chroma为希腊语中的颜色;graphein表示书写)是一种物理化学的方法,利用的是被分离物质,在两相中亲和力不同的事实,进行化合物分离。电泳方法是用电场将物质分开。分子到达...[继续阅读]

    我们现在使用的色谱方法是从Tswent于1903年开发的程序中衍生而来。Tswent的程序可以使他能够用固体吸附剂分离溶解的植物色素。应用色谱分离的主要先决条件是,在混合物中含有的待分析物质,当溶解或者蒸发时不发生化学变化。在...[继续阅读]

    核酸是(多聚)酸类,因此带负电,在电场中向正极迁移。分离过程依赖于使用的电压、胶的性质以及被分离分子的电荷和形状。核酸分离方法的选择是依据被分离的分子大小和想要得到的分辨率。使用最频繁的方法是以下的胶系统:琼脂...[继续阅读]

    Ausubel,F.M.(ed.)1999,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Wiley,NewYork.Sambrook,J.,Russel,D.2001,MolecularCloning:ALaboratoryManual,3rdedn,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor.Voet,D.,Voet,J.G.,Pratt,C.W.2004,Biochemistry,3rdedn,JohnWiley&SonsI...[继续阅读]

    正如Watson和Crick在1953年首次描述的那样,互补的核酸序列形成的双链是整个生物界基因复制和表达的基础。在鸟嘌呤和胞嘧啶之间的碱基配对有三个氢桥参与(G-C对),而腺嘌呤和胸腺嘧啶之间的配对有两个氢桥参与(A-T对)(图2.19)。在D...[继续阅读]

    核酸杂交的能力为其定性和制备的可能性开启了广阔的空间。重要的特征是在实验中利用高温可以将核酸保持在单链状态,当冷却时,它们将识别和发现溶液中与之互补的伙伴分子并与其结合。与互补核酸链的结合是一个双分子过程...[继续阅读]

    11.3.1克隆检测、Southern印迹、Northern印迹和基因诊断一旦有了克隆或者扩增的DNA片段,就可能将放射性或者荧光标记贴到特定的核酸探针上。这些探针可以作为杂交探针用来分析被固定在诸如尼龙或者硝酸纤维素膜上的核酸。早期的事...[继续阅读]

    Clark,M.1996,InSituHybridization:LaboratoryCompanion,Wiley-VCH,Weinheim.Grunstein,M.,Hogness,D.S.1975,Colonyhybridization:amethodfortheisolationofclonesDNAsthatcontainaspecificgene,Proc.Natl.Acad.Sci.USA72(10),3961-3965.Jäger,R.1996,EinfluβdesProto-O...[继续阅读]

    限制性酶是特异性切割核酸序列的内切酶(图12.1)。当研究人员想查明细菌是如何防范病毒入侵者时发现了它们。当外源DNA被导入细菌,例如通过噬菌体感染,被限制性酶切割成功能失调的片段。细菌的DNA由于限制性酶的识别位点被甲基...[继续阅读]