重组蛋白可在大肠细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等体系中得到高效表达,其表达形式一般可分为:①细胞外的分泌表达;②细胞内可溶性表达;③细胞内不溶性表达,即产物以包涵体的形式存在。菌体重组蛋白的提取,包括细胞破碎、...[继续阅读]

    真菌是一类种类繁多、结构多样的生物,从单细胞的酵母菌到高度分化的直径大于1m的大型真菌。真菌中含有大量的蛋白质,其中蘑菇中蛋白质含量占到其干重的31%。因此真菌蛋白质的提取,其来源比较广泛。而且真菌中的一些酶和人类...[继续阅读]

    细胞由细胞膜、细胞核和细胞质组成,而细胞质中含有的若干细胞器和细胞骨架等,称为亚细胞组分。当要提取的蛋白质存在于亚细胞组分中时,首先要提取亚细胞组分,再提取其中的目标蛋白质,这样可以防止其他细胞组分中的物质对目...[继续阅读]

    植物细胞除了含有与动物细胞一样的细胞器,如细胞核、线粒体、核糖体、内质网外,还有动物细胞没有的叶绿体。因此,也和动物细胞一样,如果要分离制备分布在这些细胞器中的蛋白质,为了防止其他细胞组分中的物质对目的蛋白的干...[继续阅读]

    当需要提取的酶存在于富含酚及酚类化合物的植物绿叶、水果和蔬菜组织时,必须除去酚及酚类化合物,否则会影响后面的提取分离工作。酚类化合物在完整的组织和细胞中是不被氧化的,但是当组织破损时,酚类化合物在PPO、单酚氧化...[继续阅读]

    沉淀是溶液中的溶质由液相变成固相析出的过程。沉淀法因其具有简单、经济和浓缩倍数高的优点,而成为分离纯化蛋白质和酶的常用方法之一。通过沉淀,将目的蛋白质转入固相沉淀或留在液相,而与杂质得到初步的分离。此方法的...[继续阅读]

    (一)基本原理蛋白质等生物大分子物质在水溶液中以一种亲水胶体形式存在,无外界影响时,呈稳定的分散状态(如图3-1)。其主要有两个原因:一是蛋白质为两性物质,在一定pH条件下呈现一定的带电性,因而在水溶液中会因静电作用而相互...[继续阅读]

    向水溶液中加入一定量亲水性的有机溶剂,降低溶质的溶解度,使其沉淀析出的分离纯化方法,称为有机溶剂沉淀法。其机理主要有:①亲水性有机溶剂加入溶液后降低了介质的介电常数,使溶质分子之间的静电引力增加,聚集形成沉淀;②...[继续阅读]

    等电点沉淀的原理:两性电解质在溶液pH处于等电点(pI)时,分子表面静电荷为零,导致赖以稳定的双电层及水化膜的削弱或破坏,分子间引力增加,溶解度降低,从而相互聚集,沉淀析出。利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定...[继续阅读]

    将亲和试剂加入到含有靶蛋白的混合溶液中,就可以形成亲和配体-靶蛋白的共聚物。这种共聚物可以在一定条件下形成沉淀,通过过滤或离心的方式进行分离,然后将酶或蛋白质从亲和配体-聚合物上解离下来。这一过程类似于蛋白质的...[继续阅读]