2.3.2 GAG的提取方法

    软骨组织是CS的主要来源,而非软骨的结缔组织中(如皮、腱等)则同时含有CS和DS。如果从组织中先制取PG,再由PG制得GAG则成本必然较高,故均由组织直接通过蛋白质水解制得总GAG,再由总GAG中分离得到CS或DS。2.3.2.1　碱水解法GAG可由碱水......查看详细>>

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2.4 GAG的回收^[3-7]

    通过蛋白质水解制得的GAG,可通过以下方法进行回收:(1)在氯化钠或醋酸钠存在下用乙醇沉淀;(2)用季铵盐沉淀,常用的季铵盐有氯化十六烷基吡啶(cetylpyrydiniumchloride,CPC)和溴化十六烷基三甲基铵(cetyltrimethylammoniumbromide,CTAB)等;(3)用阴离子......查看详细>>

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2.5.1 乙醇分级分离

    乙醇分级分离是分离GAG混合物的常用方法,适用于大规模分离,尤其适用于CS/DS与CS分离和KS与CS分离。在适合的条件下,此法可直接用于组织消化液。如有多种GAG存在,可先将混合物用季铵盐或离子交换剂分离后,再用乙醇分级分离,效果更......查看详细>>

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2.5.2 季铵盐法

    GAG的聚阴离子与某些表面活性物质如CPC、CTAB等形成络合物,在低离子强度的水溶液中不溶解。离子强度大时,这种络合物可解离并溶解。使络合物沉淀解离的最低盐浓度称为临界盐浓度,这取决于GAG聚阴离子的电荷密度和酸根(硫酸基和......查看详细>>

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2.5.3 阴离子交换色谱法

    GAG由于具有酸性基团,在溶液中以聚阴离子的形式存在,可用阴离子交换剂进行交换吸附。可采用的阴离子交换剂有DEAE-纤维素、Q-SepharoseFastFlow、AmberliteFPA94Cl、Dowex1-Cl等。将一种牛软骨的粗制品用Q-SepharoseFastFlow阴离子交换剂柱吸附......查看详细>>

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2.5.4 其他方法

    凝胶过滤色谱也用于分离GAG,GAG洗脱部位取决于其分子大小。色谱固定相包含特定大小范围的孔隙,GAG根据其分子大小,被排出在孔外或在孔内与孔外的流动相中保持平衡。选用合适的分子筛,如葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝......查看详细>>

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2.6 GAG的鉴别^[10，15]

    采用能特异降解GAG的酶,可明确鉴别不同的GAG,见表2.4。某一种酶对某种GAG敏感,生成降解产物,然后通过色谱法检测,明确GAG的种类。表2.4GAG特异性解聚用酶*[10]续表注:*+敏感;-抗性;乙酰肝素酶和肝素酶均指源自Flavobacterium的产品。如下......查看详细>>

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2.7 结语

    本章介绍了几种提取分离GAG的方法。在实际工作中不能只依靠一两种即达到分离纯化GAG的目的,硫酸化程度、IdoUA含量和Mr均能影响提取分离过程,只有通过实验选取适宜的方法和合适的条件才能获得高产量和高纯度的产品。探索低成......查看详细>>

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3.1 引言

    硫酸软骨素(CS)是共价连接在蛋白质上形成蛋白聚糖(PG)的一类糖胺聚糖(GAG)。CS广泛分布于动物组织的细胞外基质(ECM)和细胞表面,糖链由交替的葡糖醛酸(GlcUA)和N-乙酰半乳糖胺(GalNAc,又称N-乙酰氨基半乳糖)二糖单位组成,通过一个四糖......查看详细>>

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3.2 GAG的结构^[3]

    GAG是线性、可硫酸化、带负电荷的多糖,相对分子质量(Mr)范围(10～100)×103。GAG主要有两类:非硫酸化的GAG,包括玻璃酸(HA,又称透明质酸);硫酸化的GAG,包括CS、DS、硫酸角质素(KS)、肝素(Hep)和硫酸乙酰肝素(HS)。GAG主链由重复二糖单位组成......查看详细>>

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